DNA pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)

DNA pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)

1. 實(shí)驗(yàn)原理

DNA pull down是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術(shù)將生物素標(biāo)記的DNA 片段結(jié)合在鏈霉親和素磁珠上，再與細(xì)胞核蛋白孵育，純化出與DNA 片段互作的蛋白，洗滌洗脫得到的蛋白產(chǎn)物，做Western blot檢測特定蛋白是否與靶DNA 片段結(jié)合；做質(zhì)譜鑒定即可篩選出與DNA 片段可能互作的蛋白信息(如：轉(zhuǎn)錄因子、組蛋白等)。

生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強(qiáng)度最高的非共價(jià)作用；其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導(dǎo)下，與已知的幾乎所有生物大分子偶聯(lián)。因此用生物素標(biāo)記核酸后，可以純化出與該核酸結(jié)合的各種生物大分子復(fù)合物。

2. 實(shí)驗(yàn)流程

1）探針設(shè)計(jì)及標(biāo)記：針對靶標(biāo)區(qū)域設(shè)計(jì)特異性DNA探針，探針經(jīng)過脫硫生物素標(biāo)記，跟偶聯(lián)在磁珠上的鏈霉親和素結(jié)合;

2）Pull down：細(xì)胞核提取物與磁珠-DNA探針孵育，靶DNA可以和DNA探針特異性結(jié)合，純化出與靶DNA 片段結(jié)合的蛋白復(fù)合體，經(jīng)過洗滌可以將非特異性結(jié)合蛋白質(zhì)去除；最后，洗脫得到與靶DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)復(fù)合物；

3）互作蛋白質(zhì)鑒定：再經(jīng)過Western Blot或質(zhì)譜(MS)鑒定蛋白質(zhì)。

3. 技術(shù)服務(wù)

1）DNA探針的設(shè)計(jì)與合成；

2）細(xì)胞培養(yǎng)與核蛋白提取；

3）Pull down捕獲互作蛋白；

4）Western blot驗(yàn)證；

4）MS鑒定可能的互作蛋白。

4. 交付結(jié)果

1）客觀公正的實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)和分析結(jié)果；

2）提供詳細(xì)、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

上海昆盟生物科技有限公司 (Coweldgen Scientific Co.,LTD) 是一家專注于生命科學(xué)領(lǐng)域提供相關(guān)試劑產(chǎn)品和服務(wù)的生物高科技企業(yè)，坐落于上海聚科生物產(chǎn)業(yè)園。公司提供種類齊全的細(xì)胞系和多種原代細(xì)胞、質(zhì)量穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)試劑產(chǎn)品、成熟高效的技術(shù)服務(wù)。本著“守正創(chuàng)新，科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)"的理念，我們以高標(biāo)準(zhǔn)塑造行業(yè)品牌，以全新視野構(gòu)建現(xiàn)代企業(yè)，勇于探索和創(chuàng)新。公司業(yè)務(wù)范圍涉及全國各省市自治區(qū)，與國內(nèi)多家醫(yī)院、高校、科研院所、生物科技公司建立了良好的合作關(guān)系，贏得了良好的市場聲譽(yù)和廣泛的認(rèn)可，我們保證將繼續(xù)為廣大科研用戶提供專業(yè)、高效、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)！

細(xì)胞系(帶STR鑒定) | 原代細(xì)胞 | 細(xì)胞培養(yǎng)基 | 血清 | 細(xì)胞培養(yǎng)添加因子 | 標(biāo)記細(xì)胞 | 耐藥細(xì)胞 | 生化檢測試劑盒 | WB試劑 | 抗體 等；ATAC-seq分析 | ChIP-seq分析 | 16S rRNA測序分析 | Pull down實(shí)驗(yàn) | RIP 實(shí)驗(yàn) | ChIP實(shí)驗(yàn) | Co-IP實(shí)驗(yàn) | 質(zhì)譜檢測 | WB檢測 | PCR檢測 | 細(xì)胞培養(yǎng)/增殖/凋亡/周期/遷移/侵襲/自噬 | 活體成像 | 免疫組化 | 電鏡檢測 | micro-CT 檢測  等。更多信息，歡迎垂詢上海昆盟生物科技有限公司。