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細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)支原體污染,該怎么辦?

更新時(shí)間:2022-02-23點(diǎn)擊次數(shù):2109

細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)支原體污染,該怎么辦?

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謹(jǐn)記:對(duì)抗污染,預(yù)防大于一切!


細(xì)胞培養(yǎng).png

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,很多小伙伴兒一直受到支原體污染的困擾,我自己養(yǎng)的細(xì)胞曾經(jīng)也遇到過支原體污染,深受其害呀!針對(duì)于支原體污染來說,大家一定注意預(yù)防!如果已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一絲絲污染跡象,就要做到早發(fā)現(xiàn)、早挽救!如果細(xì)胞能夠救回來,還是可以繼續(xù)實(shí)驗(yàn)的,不耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。不過,確實(shí)也很難*清除??!如果說實(shí)在救不回來,那就再買一株新的細(xì)胞吧!最后,要買細(xì)胞的同學(xué)和老師,可以電話或郵箱聯(lián)系我們哦!

支原體污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成多方面的不良影響,已經(jīng)成為在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的一個(gè)嚴(yán)重問題,嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。因此,定期進(jìn)行支原體檢測(cè)和去除,確保無支原體存在細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)才能獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

什么是支原體(Mycoplasma)

支原體是1898年Nocard等發(fā)現(xiàn)的一種類似細(xì)菌但不具有細(xì)胞壁的原核微生物,能在無生命的人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖,直徑50-300nm,能通過細(xì)菌濾器。過去曾稱之為類胸膜肺炎微生物(pleuropneumonia-like organism,PPLO)。1967年正式命名為支原體。

支原體模式圖.jpg

支原體又稱霉形體,支原體細(xì)胞中可見的細(xì)胞器只有核糖體(支原體是原核細(xì)胞,原核細(xì)胞的細(xì)胞器只有核糖體)。支原體是目前發(fā)現(xiàn)的smallest、simplest的原核生物,可以輕松地通過濾膜,混入培養(yǎng)系統(tǒng)中,呈高度多形性,多數(shù)呈球形,也有桿形、絲狀、分支狀等多種形態(tài)。通常依附在細(xì)胞膜表面,支原體沒有剛性的細(xì)胞壁,因此普通的抗生素對(duì)它根本不起作用,實(shí)驗(yàn)室常見的種類有:口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、發(fā)酵支原體、人型支原體、唾液支原體、肺支原體和梨支原體等。

支原體污染的后果

細(xì)菌和真菌造成的污染相對(duì)比較容易檢測(cè)、預(yù)防和去除,然而支原體造成的污染很難察覺,即使生長(zhǎng)密度高達(dá) 10^7-10^9 CFU/mL,也很難有污染跡象(渾濁、pH變化等)。支原體污染后會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)變慢,狀態(tài)變差,不會(huì)馬上使細(xì)胞致死,但會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)的各種參數(shù),如改變細(xì)胞膜抗原性,改變細(xì)胞新陳代謝,干擾核酸的合成,改變 DNA 轉(zhuǎn)染效率,導(dǎo)致染色體畸變等。 

一階扇形圖.png

支原體污染來源

1. 工作環(huán)境的污染

2. 培養(yǎng)基或其他試劑的污染

3. 污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染

4. 實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染

5. 操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)

6. 用來制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。

細(xì)胞遇到支原體污染,該怎么辦?

1. 疑似支原體污染,可通過檢測(cè)來確認(rèn)是否污染;

2. 經(jīng)檢測(cè)沒有發(fā)現(xiàn)支原體污染,可采用支原體預(yù)防試劑,在平時(shí)實(shí)驗(yàn)中做好環(huán)境和實(shí)驗(yàn)用具的消毒工作;

3. 經(jīng)檢測(cè)確為支原體污染,使用支原體去除試劑進(jìn)行挽救;如果救不回來的,只能重新復(fù)蘇一管或者引進(jìn)新的細(xì)胞;如果能夠挽救回來,后續(xù)實(shí)驗(yàn)中要定期采用支原體預(yù)防試劑,避免支原體的污染。



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