說說關(guān)于細(xì)胞外泌體研究的幾個(gè)重要問題

　　外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，細(xì)胞外泌體研究是近些年研究的熱點(diǎn)。

　　

　　細(xì)胞外泌體主要原理是根據(jù)外泌體的密度、粒徑、沉降系數(shù)和親和力等差異進(jìn)行分離，提取方法包括傳統(tǒng)的差速離心、密度梯度離心，以及后來發(fā)展的超濾法、聚合物沉淀法、免疫分離、隔離篩選法、體積排阻色譜法等。這些方法各有利弊。

　　

　　細(xì)胞外泌體研究常見問題：

　　

　　1、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，如何避免血清來源的外泌體污染？

　　

　　細(xì)胞培養(yǎng)離不開血清，而血清中一般都含有外泌體，為避免血清外泌體的干擾，建議通過超速離心的方法自制去外泌體血清或者使用商品化的去外泌體血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

　　

　　2、細(xì)胞培養(yǎng)過程中的死細(xì)胞是否會(huì)影響外泌體的提??？

　　

　　會(huì)。細(xì)胞凋亡過程會(huì)釋放大量囊泡，在外泌體的提取純化過程中會(huì)污染活細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體。所以在收獲細(xì)胞時(shí)，死亡細(xì)胞比例最好不要超5%。

　　

　　3、分離細(xì)胞上清外泌體需要多少體積？

　　

　　不同細(xì)胞系需要的量會(huì)有差異。釋放量較高的細(xì)胞系，細(xì)胞上清需要幾毫升即可；釋放量低的細(xì)胞系則可能需要上百毫升，需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索。

　　

　　細(xì)胞外泌體研究通常與高通量測(cè)序的研究緊密，大致可以分為三大類：

　　

　　1、表達(dá)譜：特點(diǎn)是短平快，通常以測(cè)序數(shù)據(jù)為主要內(nèi)容，影響因子3-5；

　　

　　2、分子標(biāo)志物：特點(diǎn)是在表達(dá)譜基礎(chǔ)上加入大量樣本驗(yàn)證，建立ROC、KM曲線，分析分子與臨床疾病的相關(guān)性為主，文章影響影子3-10；

　　

　　3、分子機(jī)制研究：要做到細(xì)胞功能、機(jī)制研究深度，因此工作量較大，影響因子也較高。