標(biāo)記細胞株要如何保存？

　　細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限，可稱為有限細胞系，如可以連續(xù)培養(yǎng)，則稱為連續(xù)細胞系，培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。所以細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講，可培養(yǎng)到40-50代。細胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。對于人類腫瘤細胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。

　　
 

　　標(biāo)記細胞株是在細胞系中穩(wěn)轉(zhuǎn)特定的標(biāo)簽（LUC、GFP、RFP等），此細胞株可以作為示蹤工具細胞，為細胞成像以及活體成像提供便利。細胞株要如何存儲？

　　

　　1、紫外消毒30min后關(guān)閉紫外燈，開啟超凈臺正常工作狀態(tài)，用酒精消毒操作者的雙手。

　　

　　2、將所需的培養(yǎng)基，胰酶確保瓶身干凈后放于工作臺面內(nèi)，點燃酒精燈，將培養(yǎng)基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后，再將瓶口對準在酒精燈上消毒2-3次，旋開瓶蓋后再次分別消毒瓶口和瓶蓋，分別放于酒精燈的兩側(cè)。特別是將培養(yǎng)基瓶放于斜架上，瓶口對準酒精燈，且放在距離酒精燈zui近的位置，瓶蓋置于酒精燈的另一側(cè)。

　　

　　3、將培養(yǎng)瓶瓶口在酒精燈上消毒2-3次，旋開后分別再次消毒瓶口和瓶蓋2-3次，蓋放于酒精燈右側(cè)后將培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液懸空倒進污缸，在酒精燈消毒2-3次瓶口，豎直放好。取1ml移液器快速移動在酒精燈上消毒1-2次，然后再裝上槍頭吸取1.5ml胰酶液，懸空移入培養(yǎng)瓶內(nèi)。

　　

　　4、將培養(yǎng)使胰酶浸沒整個瓶壁的細胞層，計時約40s，立馬豎起對著燈光可觀察到細胞與細胞之間有針孔樣縫隙，并有1-2個細胞脫落，這時為胰酶消化的時機。若看到成片的細胞從瓶壁脫落為胰酶消化過度；若看不到針孔樣縫隙和細胞脫落，則需繼續(xù)消化，輕輕的迅速平放培養(yǎng)瓶使胰酶浸沒細胞層1s后迅速豎起對著燈光觀察細胞情況，可反復(fù)幾次，直至出現(xiàn)針孔樣縫隙和1-2個細胞脫落的消化狀態(tài)，用移液器將胰酶吸凈。

　　

　　5、吸取1ml細胞凍存液于培養(yǎng)瓶內(nèi)，并用移液器吸取少量的培養(yǎng)基輕柔的反復(fù)沖洗培養(yǎng)瓶壁5-8次，使貼壁細胞*脫落于培養(yǎng)基內(nèi)再輕輕吹打2-3次，使細胞盡可能處于單個懸浮狀態(tài)。

　　

　　6、將1ml含有標(biāo)記細胞株的凍存液移入新的保種管內(nèi)，擰緊瓶蓋，做好實驗標(biāo)記。

　　

　　7、將培養(yǎng)基瓶口和瓶蓋消毒2-3次后擰緊，熄滅酒精燈，整理實驗臺面，取出實驗試劑及污缸等，關(guān)閉超凈工作臺。

　　

　　8、將保種管先放于4℃冰箱30min后拿出放置-20℃冰箱過，次日再放于-80℃的冰箱內(nèi)3-4天，存放于-196℃的液氮灌內(nèi)長期保存。