原代心肌細(xì)胞間的培養(yǎng)都有哪些抗污染措施？

　　成纖維細(xì)胞比心肌細(xì)胞更容易貼壁，具有分裂增殖能力。差異貼壁后，原代心肌細(xì)胞間中仍有少數(shù)成纖維細(xì)胞混雜，如果處理不當(dāng)，很容易長成優(yōu)勢細(xì)胞。溴脫氧尿苷(BrdU)可以干擾細(xì)胞有絲分裂，因此BrdU常規(guī)用于抑制成纖維細(xì)胞的生長。但如果用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，由于胎牛血清含有很多促有絲分裂因子，BrdU很難抑制成纖維細(xì)胞的生長。使用小牛血清可以克服這種現(xiàn)象，獲得90%以上的心肌細(xì)胞。

　　

　　觀察原代心肌細(xì)胞間形態(tài)時，接種密度低，貼壁心肌細(xì)胞數(shù)量減少。為了防止存活的心肌細(xì)胞隨著液體的更換而被丟棄，液體的更換應(yīng)在接種48小時后進(jìn)行。這不僅會顯著增加貼壁心肌細(xì)胞的數(shù)量，還會使BrdU需要更長的時間來抑制成纖維細(xì)胞。另外，其和0.1gL1BSA能為心肌細(xì)胞提供營養(yǎng)支持，但對心肌細(xì)胞的黏附率和凋亡率無明顯影響。

　　

　　除無菌操作等常規(guī)技術(shù)方法外，還應(yīng)特別注意以下幾點：獲取心臟時，避免切開消化道。比較安全的方法是切開劍突上肋，不涉及腹腔，減少污染機會。在條件允許的情況下，避免新生大鼠心肌細(xì)胞與其他細(xì)胞在同一培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)，防止交叉污染。培養(yǎng)心肌細(xì)胞的觀察。

　　

　　原代心肌細(xì)胞間培養(yǎng)液適宜的pH范圍為7.2~7.4。配制和使用培養(yǎng)基時，應(yīng)注意：

　　

　　1、過濾后pH值會增加0.1~0.3。

　　

　　2、培養(yǎng)基中加入血清后，pH值會降低，降低的程度與血清的質(zhì)量和含量有關(guān)。

　　

　　3、及時更換液體。

　　

　　4、配制好的培養(yǎng)液不宜在4℃下長期保存。這是因為培養(yǎng)液中的CO2會溢出，培養(yǎng)液的pH會升高。每種配制好的培養(yǎng)液應(yīng)盡可能在2周內(nèi)用完，否則應(yīng)部分保存在-20℃下。使用前要補充谷氨酰胺和碳酸氫鈉，再次過濾后才能使用。