原代細胞分離培養(yǎng)中的注意事項

　　原代培養(yǎng)的細胞，來源于胚胎、組織器官和外周血，通過特殊的分離方法制備，稱為原代細胞。初步分離得到的細胞具有與體內(nèi)細胞相似的生物學特性，是研究生進行與物體相關(guān)的生命活動的理想材料。

　　

　　原代細胞分離培養(yǎng)是從體內(nèi)取出人/小鼠模型動物特異性細胞，用胰蛋白酶和螯合劑(EDTA)處理，分散成單細胞，并在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得細胞能夠存活、生長和繁殖的過程。原代培養(yǎng)是指細胞、組織和器官直接從體內(nèi)取出后立即進行培養(yǎng)。此時的細胞保持了原細胞的基本性質(zhì)，如果是正常細胞，則仍保留二倍體數(shù)。但實際上，一代至第十代內(nèi)培養(yǎng)的細胞一般稱為原代細胞培養(yǎng)。常用的原代培養(yǎng)是組織塊培養(yǎng)和分散細胞培養(yǎng)。
 

　　

　　原代細胞分離培養(yǎng)中的注意事項：

　　

　　1、原代培養(yǎng)材料的選擇，盡量選擇繁殖能力強的組織，如胚胎、幼體或腫瘤組織等。

　　

　　2、注意無菌操作。

　　

　　3、整個取樣操作要迅速，尤其是孕鼠要在乙醇中浸泡1min左右，時間不宜過長，以保證胚胎細胞的活性。

　　

　　4、采用消化法時，胰酶的溫度應(yīng)低于37℃，胰酶的濃度應(yīng)僅為平時消化細胞濃度的一半。因為這個過程不像細胞消化培養(yǎng)時的1~10min，而是至少20min，一次消化的細胞在這個胰蛋白酶消化液中繼續(xù)消化10min以上。所以胰酶不能作用太強，否則這些細胞容易受損，不容易存活。

　　

　　5、如果采用組織塊法，應(yīng)在組織塊略干，能貼在瓶壁上時，與培養(yǎng)液接觸，使組織塊能浮起。如果組織塊不貼在壁上，細胞就不容易生長，即使生長也不貼在瓶壁上，生長中的細胞因為無法觀察而無法收集。

　　

　　6、在原代培養(yǎng)操作中，也可用無血清的DMEM或PBS洗滌子宮、胚胎或組織塊等。

　　

　　7、新生乳鼠也可作為原代細胞分離培養(yǎng)的培養(yǎng)材料。此時應(yīng)將乳鼠浸泡在75%的乙醇中2~3分鐘，使皮膚充分消毒。因為乳鼠的原代培養(yǎng)有較高的污染概率，所以要小心處理，避免細菌污染。乳鼠原代培養(yǎng)細胞存活率不如胚胎細胞培養(yǎng)成功率高。